项目简介：

本项目针对优良种猪育种进展缓慢、效率低，而体细胞克隆胚胎移植后受孕率低、卵母细胞获得难、系谱不明以

及伦理等相关问题，拟通过引进国外高新技术和联合攻关，创建一套动物良种高效克隆技术体系，实现批量、工

厂化复制优质种猪，保护良种资源，建立繁殖率高、抗病能力强的克隆猪核心群，并开展克隆猪生长特性及营养

消化和利用的研究。通过体细胞核移植（SCNT）技术获得胚胎干细胞，诱导分化为猪雌性生殖干细胞（FGSc），

并逐步培养发育成卵母细胞样细胞，有望彻底将解决上述相关科学难题。真正打破发达国家对顶级种猪市场的垄

断，突破种猪引进的贸易壁垒，规避疫病风险，降低种猪选育成本和生猪养殖成本，提高商品猪生产性能和肉质

品质，从而改善养猪生产链条，全面提高养猪效益，促进畜牧业的发展。

湖南惠生农业科技开发股份有限公司与湖北省农业科学院畜牧兽医研究所、新西兰皇家农业科学院（AgResearch

）、中国科学院亚热带农业生态研究所印遇龙院士团队自2018年起开展深度的产学研合作，共同签署了“桃源黑

猪”综合开发利用合作协议，并联合申报了多项国家、省部级科研项目，取得了可喜的成绩。项目组通过基因编

辑肌抑素基因（MSTN）提高地方猪瘦肉率、降低背膘的目的，目前已获得MSTN双等位基因删除的桃源黑猪育种新

材料，并申报了生物安全评价中间试验。AgResearch在试管胚胎生产、克隆技术领域领先于世界，开发了大批量

商用克隆技术，降低了生产成本，而且使克隆效率提高了2倍。直接参与本项目的David Wells教授主要致力于基

因编辑和体细胞克隆等现代生物繁殖新技术的研究，曾参与“多利羊”的创制。

本项目瞄准目前非洲猪瘟导致我国的优良种猪紧缺以及我国养猪业跨越式发展的重大需求，拟围绕猪的高效繁殖

育种新技术开展系统研究与创新，建立完整的技术链条，实现新技术和优良猪种的战略储备。该项目的技术成果

，将为国内外高校、科研院所以及养猪龙头企业提供技术服务，实现“产、学、研”相结合的长远目标，为我国

畜牧业将带来广泛的经济效益和社会效益。

技术/产品创新性：

1 构建猪IVF胚胎模型 （1）采用ICSI技术制备IVF胚胎，在60 mm 培养平皿盖中央做一个100μl TL-Hepes滴，用于放卵，在Hepes滴两 旁做两组10μl DPBS-PVA 滴，用于放置精子，覆盖石蜡油。 （2）精子操作液滴中，注射针在尾部中段处划过使其失去活动能力（精子制动），从精子尾部吸入到注射针的 开口端，然后转移到卵母细胞操作滴中，回吸少的量卵母细胞质，再将整个精子连同微量精子操作液注入到卵母 细胞质内。 2 SCNT胚胎的制备 （1）原始基因库的准备：选择纯种大约克、长白、杜洛克和桃源黑猪的耳组织，用组织剪充分剪碎，至碎片小 于 1mm2，用微量加样器将组织块转移入50ml离心管中，加入 5 倍体积的 0.25%胰酶，置37℃培养箱进行消化。 每隔5min 混匀一次，消化约 20min 后，加入等量含 10%血清的 DMEM/F12 培养基终止消化。1000rpm 离心10mi n，弃上清，加 DMEM/F12 培养液悬浮细胞，并转移入培养皿中（约 8-10ml 培养液/皿），置于39℃，5%CO2培 养箱中培养，待细胞贴壁较密集后换液。当猪胎儿成纤维细胞长满皿底约90％，传代培养，冷冻保存。 （2）供体细胞液氮冷冻储存：组织块接种培养的细胞生长至80%汇合时，用弯头吸管吸出原来的培养液；加入DP BS洗涤2遍，然后没个瓶中加入3ml消化液，39℃消化5min；待大于80%细胞脱壁后，加入6ml细胞培养液终止消化 ，用弯头吸管吹打贴壁细胞；将消化后的细胞混合转移到15ml离心管中，1200rpm，离心5min，去上清液，加入1 ml细胞培养液，进行细胞计数，调整细胞密度，按1×105个/ml，分装到细胞冻存管内，将标记好的冻存管放入 细胞冻存盒或将细胞冻存管放入聚乙烯泡沫盒中密封之后4℃冰箱中置30min，再放入-80℃冰箱过夜，取出过夜 的冻存管，直接放入液氮中。 （3）猪卵母细胞的采集和体外培养（IVC）：从当地屠宰场采集卵巢，放入30-35℃生理盐水的保温瓶中，2h内 送回实验室。用配有16号针头的10 ml注射器抽吸直径为3-8 mm 的卵泡，挑选卵丘包裹3层以上卵丘卵母细胞复 合体（Cumulus oocyte complexes, COCs），COCs 在NCSU-23中培养42-44 h后，收集MII卵母细胞。 （4）去核注核：挑选排出第一极体（PB1）且透明带清晰的卵母细胞作为核受体。在荧光显微镜下吸除PB1及卵 母细胞核物质，透明带下注射成纤维细胞； （5）融合/激活：重构胚胎放入铺满融合/激活液的融合槽中，电极宽度为3mm，施加一个50 μs，450V，2次直 流电脉冲诱导融合并同时激活。

知识产权情况：

行业情况：

市场情况：

项目团队情况：